技術文章
Technical articles
過去用于檢測Tg自身抗體的方法有：沉淀試驗、間接免疫熒光(11F)、血凝試驗、ELISA和放射定量分析。目前常用IIF法和ELISA法。IIF法熒光圖形為在甲狀腺濾泡腔內出現波浪狀著染。在甲狀腺炎患者中抗TPO抗體檢測方法的靈敏度稍遜于抗Tg抗體，但實際上兩者的檢出率不相上下。用高靈敏度方法檢測Tg，可能會降低與疾病相關的特異性。一些評估Tg自身抗體特異性的研究表明，甲狀腺功能正常的個體與自身免疫性甲狀腺炎免疫應答之間存有一定的差別。正常人亦可產生能識別相同或具有交叉反應性抗...
很多免疫學技術依賴于標記抗體的使用。對抗體進行標記主要是用于抗原的定位分析，在某些情況下，也可以對混雜有大量其他分子的樣本中的抗原進行定量檢測。由于抗體與其相應抗原具有很高的親和力，因此帶有易識別標記物的抗體可以定位分析抗原，并且是一種理想的快速價廉的定量測定方法。需要使用標記抗體的三種方法，即免疫染色法、免疫印跡法和免疫分析。此三種方法均能定位復雜混合物中的抗原，而且通過適當的對照也能定量測定。就免疫染色法而言，其目的就是定位正常細胞環境中出現的抗原。在此背景下，所有抗原均...
1．如果使用經免疫沉淀法得到的蛋白，按常規洗滌免疫復合物。盡可能*去除zui后的洗液。如果使用其他來源的蛋白，則將其轉入20mmol／L的磷酸鹽溶液中(pH7．0)，或直接在20／1l水中重懸蛋白。蛋白濃度應低于lmg／m1。2．加入20u1．5％SDS和20mmol／LDTI。3．加熱至85C10min，仔細將上清液移入另一試管。4．加入10rd新鮮配制的0．2mmol／LN-乙基順了烯二酰亞胺(NEM)，12．5mg／m1的水溶液為飽和溶液)，使用前臨時配制。85℃溫育1...
所有的固定方案必須做到：①防止抗原丟失；②透化細胞以便使抗體進入；③盡量使抗原保持能與抗體結合的狀態；④維持細胞正常結構。常用的固定劑種類很多，固定劑的正確選擇取決于被研究抗原的性質及所用抗體的特性。固定劑可分為兩大類：有機溶劑和交聯劑。有機溶劑如乙醇和丙酮能夠去除脂類物質使細胞脫水，把蛋白質沉淀在細胞結構上。交聯劑一般通過自由氨基基團把生物分子橋連起來，形成一個相互連接的抗原網。兩種方法均使蛋白質抗原部分變性。因此，在細胞染色中，能夠識別變性蛋白的抗體更加有用。在某些情況下...
1．主要內容純化率為1000～10000倍?？焖偌兓乖瑢游鲋？芍貜褪褂??？色@得純化的抗原。不能用于定量測定。純化效果取決于抗原的濃度和抗體的親和力需要適當純化的抗體。2．操作步驟(1)將抗體結合到蛋白A或蛋白G微珠上。對于一般用途的層析柱，每毫升濕的微珠大約可以結合2mg單克隆抗體或親和純化的多克隆抗體。將抗體和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的勻漿，在總量為10ml的溶液中加入大約lml微珠，室溫孵育1h，輕輕搖動混勻。(2)用10倍體積的0．2mol／L硼酸鈉(pH9...
標記蛋白具有許多優點。原則上，該方法為檢測各種細胞成分中感興趣的蛋白提供廠新的手段。①如果開放閱讀框已經被克隆化，但是由于蛋白是新發現的，或者由于蛋白免疫原性較弱，目前尚沒有針對該蛋白產物的抗體時，此標記技術具有重要的應用價值。隨著基因組的研究，由基因工程進入蛋白工程，標記技術顯得越來越重要。②由于標記物不是天然蛋白氨基酸序列的固有部分，與標記物結合的試劑在進行蛋白提純過程中，對蛋白功能產生影響的可能性較小。③只要具備適當的載體，標記蛋白可在任何細胞中進行表達；例如，相同的標...
所謂Real-TimePCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化,通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。real-timePCR技術即實時熒光定量PCR避免了傳統PCR以終產物監測定量產生的偏差，提高實驗的重復性。該技術已經被廣泛用于監測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因...
摘要：云南農業大學動物科學技術學院近日成功育成10頭攜帶綠色熒光蛋白和瘦素蛋白的轉基因克隆豬引起各界廣泛關注，2月3日記者在云南農業大學了解到，這一成果將有助于脂肪沉積以及人類肥胖病和糖尿病等疾病的研究，也將使轉基因克隆技術在功能基因驗證、疾病模型、異種器官移植等領域的應用前景更為廣闊。云南農業大學動物科學技術學院近日成功育成10頭攜帶綠色熒光蛋白和瘦素蛋白的轉基因克隆豬引起各界廣泛關注，2月3日記者在云南農業大學了解到，這一成果將有助于脂肪沉積以及人類肥胖病和糖尿病等疾病的...
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