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1．使用來自篩選出的噬菌粒克隆的模版DNA，以及包含與AP融合表達載體的克隆位點相對應的限制性酶切位點的寡核苷酸引物，進行PCR反應。2．通過瓊脂糖凝膠電泳檢測正確大小的擴增產物。選擇相應方法對PCR產物進行純化。3．用對應于克隆位點的限制性內切酶消化PCR產物，使用標準的方法將此產物連接到相同酶切后的AP融合蛋白表達載體中。4，通過標準的方法將連接產物轉化入大腸桿菌中，鋪到含100ug/ml氨芐青霉素的LB平板上。挑取單克隆，利用標準的方法（如限制性酶切或PCR）鑒定是否有...
麥芽糖結合蛋白ELISA的方法與以前論文所述一致[1Sj，除了從大腸桿菌中釋放MBP—肽融合蛋白的裂解方法之外。我們發現，使用商業性的去垢劑（Pierce公司的B-PER抽提試劑）較溶菌酶能更簡單有效地裂解細菌細胞。3ml培養基中的經誘導的細胞先通過沉降，再通過含有0．1mmol/LEDTA的lmlB-PER重懸。于室溫下放置20分鐘后，離心5分鐘以除去細胞碎片，將上清轉移到一個新的管中。裂解物于一70~0凍存，當用于ELISA反應時按1：50稀釋。在幾個實驗項目中，我們發現...
1．合成需要的靶標DNA或RNA寡核苷酸，其中一組是5’端連接生物素的寡核苷酸鏈。為dsDNA位點合成一條不聯結生物素的互補副鏈。2．①對于DNA位點的篩選，將每條寡核苷酸鏈各取10u1，與20/A1的2X核酸退火緩沖液混勻，讓兩條互補的寡核苷酸退火。在PCR儀中以94℃加熱樣品3分鐘，然后以每分鐘2℃的速度冷卻至4℃。冷卻后，用水將溶液稀釋至1pmol/L的終濃度，于-20℃保存。②對于RNA位點篩選，用RNA折疊緩沖液（1XCM）配制1pm01/L的寡核苷酸溶液。將溶液加...
A.噬菌體的制備1．挑取含有源自文庫篩選的噬菌體克隆的單菌落。用滅菌牙簽挑取單菌落接種于滅菌圓底培養板的微孔內，其中加有150ul含15ug/ml的四環素的2×TY培養基。用一個微孔培養展示野生型DNA/RNA結合區域的噬菌體，作為陽性對照。以250r/min的速度小心振蕩微孔板，30℃培養16小時。2．在合適的吊斗式離心機中3700g離心96孔培養板15分鐘，以制備噬菌體上清液。將上清液轉移到一個新的微孔板內，4℃保存。B.噬菌體ELISA1，將生物素聯結的核酸靶標位點（通...
植物體內的一種激素脫落酸可幫助植物對抗干旱等惡劣生存條件，但科學界對這類植物激素的具體作用機制卻知之甚少。西班牙等國研究人員日前發現脫落酸幫助植物抗旱的具體機制，為有效提高植物抗旱能力開辟了新思路。此前研究曾發現，在正常環境下，植物體內一種名為PP2C的蛋白質會阻止脫落酸發揮作用，當植物處于極度干旱條件下時，這種阻斷作用就會消失，植物細胞中脫落酸的含量上升，從而幫助植物抗旱。研究同時認為，PP2C蛋白質并不會直接作用于脫落酸，而是通過另外一群蛋白質間接發揮作用。這些“中介蛋白...
體外診斷產業是醫療器械及醫藥工業的一個組成部分，中國體外診斷產業是個新興產業，共有20二十年左右的發展歷史，是一個自發形成和成長起來的產行業。體外診斷是指將樣本（血液、體液、組織等）從人體中取出后進行檢測進而進行診斷，是相對于體內診斷而言。檢測過程中需要相應的儀器和試劑，而這些儀器和試劑就組成了體外診斷系統，從事這些儀器和試劑研發、生產和營銷的企業就形成了體外診斷產行業，它匯集了生物、醫學、電子、機械等相關技術。體外診斷產品按檢驗醫學的檢測項目可分為幾個主要大類：生化、免疫、...
該系統的主要影響因素是因在蛋白上引入標記物可導致蛋白生物活性改變，因為標記的結果，本質上是制造了一個由目的蛋白和標記物氨基酸序列融合而成新的蛋白。因此，使用該技術時，應該認識到是研究新的蛋白特性，而不是研究蛋白的原來特性。但實踐經驗表明這并不成為很大的問題，通過標記蛋白獲得的信息可以采用針對原始未標記蛋白的抗體證實。第二方面的主要影響因素是在進行表位標記時，許多目前使用的標記物是由已知的蛋白（如myc基因產品）片段組成。這意味著抗標記物抗體不僅識別被研究的標記蛋白，同時還可能...
將抗原結合到抗體微珠基質上的zui簡單方法是將微珠裝到一個層析柱內，將抗原溶液流經層析柱，當抗原流經層析柱時結合到抗體上而被固定，直到洗脫時才洗脫下來。這種方法的效率是根據抗原與固定的抗體之間的接觸時間決定的，所以抗原抗體之間的作用時間可以用低流速而延長。這種方法zui大一個問題就是某些蛋白非特異性結合到分離柱上，這些蛋白可以出現在洗脫液中，從而使純化效率降低。基質本身和抗體基質復合物具有與待檢抗原溶液中蛋白質非特異性結合的表面活性。雖然這些反應較正常的抗原—抗體反應要弱得多...
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